Xác định hàm lượng Casein dựa trên phương pháp Kjeldahl bằng các thiết bị hãng VELP Scientifica thông qua các phương pháp tham khảo AOAC 998.05: Hàm lượng nitơ không casein của sữa; AOAC 991.20 Nitơ (Tổng số) trong sữa; ISO 8968 – 4 FIL 20 – 4: 2001 Hàm lượng nitơ phi protein
Contents
XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CASEIN TRONG SỮA BẰNG PHƯƠNG PHÁP KJELDAHL | APPLICATION NOTE F&F-K-006-2013/A
Phương pháp tham khảo: AOAC 998.05 Hàm lượng nitơ không casein của sữa; AOAC 991.20 Nitơ (Tổng số) trong sữa; ISO 8968 – 4 FIL 20 – 4: 2001 Hàm lượng nitơ phi protein
Được thử nghiệm trên các thiết bị của hãng VELP Scientifica với Bộ phá mẫu Kjeldahl tự động VELP Scientifica DKL 20 (Mã S30100210) và Hệ thống chưng cất & chuẩn độ Kjeldahl tự động UDK 159 (Mã F30200150), Bơm hút tuần hòa JP và Trung Hòa Khí độc SMS
Giới thiệu
Protein sữa là loại protein thực phẩm lâu đời nhất và được tiêu thụ rộng rãi nhất. Hiện đang có một mối quan tâm lớn đến những chất, cả trong lĩnh vực dinh dưỡng và ứng dụng công nghệ. Protein casein là một họ protein liên quan đến sản xuất pho mát và sữa lên men.
Chúng là những hợp chất nitơ rất quan trọng không chỉ đối với các sản phẩm sữa sản xuất, nhưng chúng cũng là chất phụ gia trong y học, và chúng có công dụng kỹ thuật trong mỹ phẩm, sơn và chất kết dính.
Hàm lượng Casein được xác định bằng sự khác biệt giữa hàm lượng nitơ tổng số (Ntot) và nitơ phi casein (NCN), thu được bằng sữa, theo quy trình được chỉ ra trong tài liệu này.
Xác định hàm lượng Casein trong sữa theo phương pháp Kjeldahl
- Kjeldahl ngày nay là phương pháp được sử dụng nhiều nhất để xác định hàm lượng nitơ và protein trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi, nhờ hàm lượng mức độ chính xác và khả năng tái tạo và ứng dụng đơn giản của nó.
- Phương pháp Kjeldahl hiện đại bao gồm một quy trình sự khoáng hóa được hỗ trợ xúc tác của vật liệu hữu cơ trong một hỗn hợp sôi của axit sulfuric và muối sunfat khi phân hủy nhiệt độ cao hơn 400 ° C.
- Trong quá trình này, nitơ liên kết hữu cơ được chuyển thành amoni sunfat. Kiềm hóa dung dịch đã tiêu hóa giải phóng amoniac được chưng cất định lượng bằng hơi nước và xác định bằng phương pháp chuẩn độ
Mẫu thử nghiệm
Sữa Bò chất lượng cao dạng lỏng, Protein nguyên chất và tiệt trùng
Giá trị được dán nhãn: 3,35 g / 100 ml
Hàm lượng casein từ tài liệu: 2,66%
Chuẩn bị mẫu
Việc xác định nitơ không phải casein (NCN) là cần thiết để tính hàm lượng casein trong sữa. NCN thu được khi tách và lọc sữa.
Hóa chất và Vật liệu để tách và lọc
- Dung dịch axit axetic 10% – 10 ml axit axetic pha loãng thành 100 ml bằng nước khử ion
- Dung dịch natri axetat 1M – 8,2 g natri axetat pha loãng thành 100 ml bằng nước khử ion
- Giấy lọc không chứa nitơ, lọc tốc độ cao
Quy trình
Việc xác định NCN trong sữa bao gồm các bước sau:
– Khuấy sữa vào cốc bằng máy khuấy từ VELP trong 60 giây. ở 700 vòng / phút.
– Kết tủa cazein và lọc
– Phân hủy dịch lọc bằng DKL 20
– Chưng cất và chuẩn độ mẫu bằng UDK 159
– Tính toán (xem các công thức sau)
Cho 20 ml sữa đã được điều nhiệt trước đó ở 20 ° C vào bình định mức 50 ml với 20 ml nước khử ion. Sau đó, đặt bình ở 37 ° C trong Bể tuần hoàn mở (OCB, Mã F40300240) trong 30 phút.
Sau khoảng thời gian này, thêm 2 ml dung dịch axit axetic (10%), lắc đều và để yên trong khoảng 10 phút.
Thêm 2 ml dung dịch natri axetat 1M, để hỗn hợp nguội xuống 20 ° C và đổ đầy nước khử ion đến vạch hiệu chuẩn.
Sau đó, lọc qua một bộ lọc giấy và thu toàn bộ dịch lọc.
Tiêu hóa mẫu
Dùng pipet cho 20 ml dịch lọc vào ống nghiệm 250 ml (Mã A00000144).
Trong mỗi ống nghiệm thêm:
- 2 viên xúc tác VCM (mã A00000274; 3,5 g K2SO4, 0,1 g CuSO4 5H20 Missouri)
- 4 viên chống tạo bọt VS (Mã A00000283)
- 15 ml axit sulfuric đậm đặc (96-98%)
- 5 ml hydrogen peroxide (~ 30%)
- Chuẩn bị một số mẫu trắng với tất cả các hóa chất và không có mẫu.
Kết nối Bộ phá mẫu với Máy bơm hút (mã JP F30620198) và Hệ thống trung hòa khói (SMS Scrubber mã F307C0199) để trung hòa khói axit tạo ra trong giai đoạn phân hủy.
Tiêu hóa các mẫu, thiết lập các độ dốc sau trong “Phương pháp có thể tùy chỉnh”: trong 15 phút ở 150 ° C cộng với 45 phút ở 200 ° C cộng với 15 phút ở 300 ° C và 60 phút ở 420 ° C
Chưng cất và chuẩn độ
Để nguội ống nghiệm đến 50-60 ° C.
Bảo dưỡng thiết bị UDK 159 bằng cách thực hiện Kiểm tra Tự động trong Hệ thống Menu và Rửa sạch.
Chưng cất các mẫu theo phương pháp xác định trước n ° 1:
- H2O (nước pha loãng): 50 ml
- H2SO4 (0,1 N) làm dung dịch chuẩn độ
- NaOH (32%): 70 ml
- Yếu tố protein: 6,38
- H3BO3 (4% với chất chỉ thị): 30 ml
Trong cài đặt UDK 159, đặt làm đơn vị đo mgN và% N cho kết quả cuối cùng và làm lượng mẫu “ml”.
Thời gian phân tích chưng cất & chuẩn độ: từ 4 phút cho một lần thử.
Kết quả:
Kết quả của nitơ phi casein (NCN) được tính theo phần trăm nitơ, sử dụng làm lượng mẫu thể tích dịch lọc (V dịch lọc) nhân với 0,4. Chúng dựa trên công thức sau:
NCN% = mg N / [(G milk/V sol) x 1000 x V filtrate] x 100
G sữa = trọng lượng sữa (20 g)
V sol = dung dịch sữa chứa tất cả các hóa chất cần thiết để tách, được làm đầy đến thể tích (50 ml)
V lọc = dịch lọc được sử dụng để thực hiện 1 phân tích (ml)
Kết quả thu được đã được xuất và nhân với hệ số hiệu chỉnh sữa nguyên chất là 0,994 (đối với sữa bán gầy sữa, hệ số hiệu chỉnh là 0,998). Casein được tính toán có tính đến tổng hàm lượng nitơ đo được (Ntot) của 0,525% trong sữa nguyên chất. (Đối với Ntot, xem Ghi chú Ứng dụng “Xác định N / Protein trong sữa theo phương pháp Kjeldahl”)
Casein% = 6.38 x (%Ntot – %NCN)
Quy trình hoàn chỉnh đã được xác minh bằng cách sử dụng 5 ml dung dịch tiêu chuẩn glycine (3%) chứa 28 mg nitơ, như chất đối chiếu. Sự phục hồi thu được rơi vào phạm vi dự kiến: từ 98% đến 102%.
Phần kết luận
Các kết quả thu được là đáng tin cậy và có thể tái lập phù hợp với các giá trị mong đợi, với tiêu chuẩn tương đối thấp độ lệch (RSD <1%), nghĩa là kết quả có độ lặp lại cao. Lợi ích của phương pháp Kjeldahl bằng cách sử dụng DKL 20 và UDK 159 là:
- Độ chính xác và khả năng tái tạo cao
- Năng suất cao
- Phương pháp chính thức trên toàn thế giới
- Phương pháp đáng tin cậy và dễ dàng
- Tiết kiệm thời gian
- Chi phí thiết bị phải chăng
- Chi phí vận hành vừa phải
Xem thêm các thiết bị chưng cất Kjeldahl như:
Máy chưng cất Kjeldahl UDK139 | Bán tự động
Máy chưng cất Kjeldahl UDK149 | Tự động
Bộ phá mẫu Kjeldahl bán tự động:
Máy phá mẫu DK8 | 8 vị trí phá mẫu, bán tự động
Nguồn bài viết được nghiên cứu và phát triễn bởi VELP Scientifica.
